污水處理-蛋白質(zhì)分離純化工藝

親和色譜法（親和色譜法）是分離蛋白質(zhì)的一種非常有效的方法。通常只需要一個(gè)步驟就可以從高純度的復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物中分離出某些要純化的蛋白質(zhì)。此方法基于某些蛋白質(zhì)與另一種稱為配體的分子特異性結(jié)合但不能共價(jià)結(jié)合的能力。基本原理：蛋白質(zhì)以復(fù)雜混合物的形式存在于組織或細(xì)胞中，每種細(xì)胞都包含數(shù)千種不同的蛋白質(zhì)。因此，蛋白質(zhì)的分離，純化和表征是生物化學(xué)的重要組成部分，沒(méi)有一種或一套現(xiàn)成的方法可以從復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物中提取任何種類的蛋白質(zhì)，因此經(jīng)常使用幾種方法。組合。

一、根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小的差異進(jìn)行分離的方法

1.透析和超濾

透析方法使用半透膜來(lái)分離不同分子大小的蛋白質(zhì)。

超濾方法使用高壓或離心力迫使水和其他小溶質(zhì)分子通過(guò)半透膜，而蛋白質(zhì)保留在膜上。您可以選擇不同的孔徑來(lái)截獲分子量不同的蛋白質(zhì)。

2.凝膠過(guò)濾法

也稱為尺寸排阻色譜法或分子篩色譜法，這是基于分子大小分離蛋白質(zhì)混合物的有效方法之一。柱中常用的填料是葡萄糖凝膠（Sephadex ged）和瓊脂糖凝膠（瓊脂糖凝膠）。

二、根據(jù)蛋白質(zhì)的帶電特性進(jìn)行分離

蛋白質(zhì)在不同的pH環(huán)境中具有不同的帶電特性和不同的電荷量，可以將其分離。

1.電泳

在相同的pH條件下，由于蛋白質(zhì)的分子量不同和電場(chǎng)中的電荷不同，因此可以分離出各種蛋白質(zhì)。值得注意的是等電聚焦電泳，它使用兩性電解質(zhì)作為載體。在電泳過(guò)程中，兩性電解質(zhì)形成一個(gè)pH梯度，從正電極到負(fù)電極逐漸增加。當(dāng)某種帶電荷的蛋白質(zhì)在其中游動(dòng)時(shí)，它將到達(dá)各個(gè)點(diǎn)。電點(diǎn)的pH位置停止，此方法可用于分析和制備各種蛋白質(zhì)。

2.離子交換色譜

離子交換劑包括陽(yáng)離子交換劑（例如羧甲基纖維素； CM-纖維素）和陰離子交換劑（二乙基氨基乙基纖維素；纖維素）。當(dāng)分離出的蛋白質(zhì)溶液流過(guò)離子交換色譜時(shí)。在色譜柱中，與離子交換劑帶相反電荷的蛋白質(zhì)被吸附在離子交換劑上，然后通過(guò)改變pH或離子強(qiáng)度來(lái)洗脫吸附的蛋白質(zhì)。

3.根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的不同分離方法

中性鹽對(duì)蛋白質(zhì)的溶解度有重要影響。通常，在低鹽濃度下隨著鹽濃度的增加，蛋白質(zhì)的溶解度增加，這稱為鹽溶解。當(dāng)鹽濃度持續(xù)增加時(shí)，蛋白質(zhì)的溶解度將不同程度地降低，并依次發(fā)生這種現(xiàn)象。將大量鹽添加到蛋白質(zhì)溶液中。高濃度的鹽離子（如硫酸銨的SO4和NH4）具有很強(qiáng)的水合能力，可以帶走蛋白質(zhì)分子的水合層，形成“水的損失”，使蛋白質(zhì)膠體凝結(jié)并沉淀出來(lái)。如果在鹽析過(guò)程中溶液的pH值處于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，則效果會(huì)更好。由于各種蛋白質(zhì)分子的粒徑和親水性不同，鹽析所需的鹽濃度也不同。因此，調(diào)節(jié)混合蛋白質(zhì)溶液中的中性鹽濃度可以使各種蛋白質(zhì)分階段沉淀。